Иммунотолерантный гепатит

Иммунотолерантный гепатит

Переезд склада в Европу.
Реализуем препараты от гепатита С в России по закупочной цене - ликвидация склада
Перейти на сайт

Hepatitis B Surface Antigen Quantification across Different Phases of Chronic Hepatitis B Virus Infection Using an Immunoradiometric Assay
Источник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4562784/

Количественная оценка поверхностного антигена гепатита B (HBsAg) является новым серологическим тестом и может быть полезна для определения стратегий лечения хронического гепатита B (CHB). Это исследование предназначалось для оценки титров HBsAg во время естественного протекания CHB и выявления корреляций между титрами HBsAg и концентрациями ДНК вируса гепатита B (HBV) в разных фазах CHB, измеренных с использованием иммунорадиометрического анализа (IRMA).

Фазы CHB определяли на основе концентраций ДНК HBV, наличия антигена гепатита B e антигена / антитела (HBeAg / Ab) и уровня аланина аминотрансферазы в сыворотке. Сывороточные титры HBsAg и парные концентрации ДНК HBV в разных фазах CHB сравнивали с использованием 627 образцов сыворотки.

Средние титры HBsAg были значительно выше в фазе иммунотолеранта (IT) и иммунореактивной (IR) HBeAg-положительной фазе, чем в низкорепликативных (LR) и HBeAg-отрицательных состояниях CHB (ENH). Корреляция между титрами HBsAg и концентрацией ДНК HBV была умеренной в фазах IT (n = 36, r = 0,804, p

Количественная оценка HBsAg с использованием IRMA может быть полезна для различения различных фаз CHB и различных стадий хронического заболевания печени.

Хронический гепатит B (CHB) является инфекционным, воспалительным заболеванием печени, вызванным семейством Hepadnaviridae, родом Orthohepadnavirus, вирусом гепатита B вида (HBV), который является основной проблемой глобального здоровья и отвечает за цирроз печени, гепатоцеллюлярную карциному (HCC) ) и связанных с этим смертей. В настоящее время от 500 000 до 1 000 000 смертей в год происходят во всем мире из-за CHB и связанных с ним осложнений.1,2 В принципе, основные стратегии лечения CHB состоят в подавлении активной репликации ДНК HBV и снижении связанных с HBV осложнений.3 С появлением (NUC), репликация HBV может быть эффективно подавлена, 4,5 и концентрации ДНК HBV в сыворотке были суррогатным маркером репликации HBV во время антивирусной терапии. Однако конечной целью лечения CHB является потеря поверхностного антигена гепатита B (HBsAg) с развитием поверхностного антитела против гепатита B (анти-HB), что связано с благоприятными клиническими результатами.6,7

Количественная оценка HBsAg теперь методологически возможна и может быть полезна для прогнозирования клинических исходов у пациентов с ХГБ. Предыдущие исследования показали, что титры HBsAg в сыворотке могут отражать количество ковалентно замкнутой кольцевой ДНК (cccDNA) в инфицированных гепатоцитах.8,9. Количественная оценка HBsAg может иметь решающее значение для мониторинга ответов на противовирусную терапию и определения оптимального времени для прекращения противовирусной терапии.10 , 11 В нескольких исследованиях исследовалась корреляция между титрами HBsAg в сыворотке и концентрациями ДНК HBV.12,13 Однако актуальность количественной оценки HBsAg сыворотки и ее клиническая полезность до сих пор не были полностью оценены.

Титры HBsAg обычно определяются на основе сложного взаимодействия между HBV и иммунной системой хозяина. Важно понимать вариации титров HBsAg на разных фазах CHB в соответствии с концентрациями ДНК HBV.14 Более того, недавние исследования показали значительную корреляцию между титрами HBsAg и концентрациями ДНК HBV на разных фазах CHB.15-18 Однако, эти исследования показали противоречивые результаты в отношении этих корреляций, в основном в которых участвовали пациенты, не принимавшие лечение, и использовали хемолюминесцентный иммуноанализ микрочастиц (CMIA). В настоящем исследовании для количественного определения HBsAg сыворотки использовался новый диагностический инструмент, использующий метод иммунорадиометрического анализа (IRMA). Диагностические характеристики метода IRMA для определения титров HBsAg можно сравнить с показателями метода CMIA.19,20 Кроме того, IRMA имеет несколько преимуществ перед предыдущими диагностическими инструментами, такими как Architect® (Abbott Diagnostics, Abbott Park, IL, USA) и Анализ Elecsys® HBsAg II (Roche Diagnostics GmbH, Мангейм, Германия) .21 Во-первых, для IRMA в отличие от CMIA не требуется дополнительной калибровочной системы, поскольку IRMA использует общий автоматический счетчик гамма-излучения для измерения титров HBsAg в сыворотке крови. Во-вторых, ожидается, что метод IRMA, используемый в этом исследовании, обеспечит диагностическую точность, аналогичную методу CMIA, по более низкой цене. Целью этого исследования было оценить динамические изменения титров HBsAg во время естественного протекания CHB-инфекции и определить корреляции между различными фазами CHB между титрами HBsAg, измеренными с использованием концентраций ДНК IRMA и HBV.

Всего было проведено 866 последовательных количественных тестов HBsAg для 785 пациентов в возрасте старше 18 лет, которые тестировали HB-sAg-положительный результат в качественных тестах в Сеульском государственном университете Сеула Национальный университет Борамае Медицинский центр с августа 2010 года по март 2011 года. эти 174 результатов испытаний не соответствовали соответствующим парам ДНК и были исключены из анализа. Из оставшихся 692 тестов 65 образцов были исключены из-за следующих причин: (1) 24 образца показали необнаруживаемые уровни HBsAg (

Соответственно, ретроспективно рассмотрены демографические данные пациентов, биохимия печени, качественный статус HBeAg / анти-HBe, клинические данные о циррозе печени (тромбоцитопения, спленомегалия, асцит и варикс) и рентгенологические данные HCC по динамической компьютерной томографии. Протокол исследования был одобрен Институциональным советом по обзору (IRB) Сеульского государственного университета Сеула Национального университета Борамее медицинский центр (номер IRB: 06-2011-119) и был согласован с этическими принципами Хельсинкской декларации 1975 года. IRB отказался от информированного согласия.

Различные фазы CHB у пациентов, не получавших лечение, были классифицированы в соответствии с сывороточным статусом HBeAg / анти-HBe, концентрациями ДНК HBV и уровнями аланин аминотрансферазы в сыворотке (ALT) на основе последних обновленных руководств Европейской ассоциации по изучению Печень (EASL) .22 Иммуногенную фазу (IT) определяли как положительную реакцию HBeAg, высокий уровень сывороточной ДНК HBV (> 10000 МЕ / мл) и нормальные уровни ALT (≤40 МЕ / л). Иммунореактивная HBeAg-положительная фаза (IR) определялась как положительная активность HBeAg, высокий уровень ДНК HBV сыворотки (> 1000 МЕ / мл) и уровни ALT выше верхнего нормального предела (> 40 МЕ / л). Низкое репликативное (LR) состояние было определено как отрицательный уровень HBeAg и уровень ДНК HBV

Пациенты, получающие оральные NUC во время количественного определения HBsAg, классифицировались следующим образом: HBeAg-положительный CHB с вирусологическим ответом (E + VR) определялся как положительный результат HBeAg и неопределяемая ДНК HBV. HBeAg-положительный CHB с частичным вирусологическим ответом (E + pVR) определялся как положительный результат HBeAg и снижение ДНК HBV более 1 log10 МЕ / мл, но обнаруживаемая ДНК HBV после 6 месяцев терапии. HBeAg-отрицательный CHB с вирусологическим ответом (E-VR) определялся как отрицательный HBeAg и неопределяемая ДНК HBV. HBeAg-отрицательный CHB с частичным вирусологическим ответом (E-pVR) определялся как отрицательный эффект HBeAg и снижение ДНК HBV более 1 log10 МЕ / мл, но обнаруживаемая ДНК HBV после 6 месяцев терапии.

Комплекты IRMA (RIAKEY, Shin Jin Medics, Гоян, Корея) использовались для количественной оценки HBsAg в соответствии с инструкциями производителя. Вкратце, образцы инкубировали с первичными шариками, покрытыми антителами, в течение 1 часа. Затем гранулы удаляли промыванием 4 раза в промывочном растворе и затем обрабатывали 125I-конъюгированным вторичным антителом в течение 30 минут. Затем радиоактивность измеряли в процентах в минуту (CPM) с использованием счетчика гамма-излучения (Packard, Downers Grove, IL, USA). Титры сыворотки HBsAg определяли путем считывания значений СРМ с стандартной кривой. Тест считался положительным, когда уровни HBsAg в сыворотке превышали 0,1 МЕ / мл (диапазон обнаружения 0,05-250 МЕ / мл). Когда уровни HBsAg превышали диапазон обнаружения, тест повторяли после разбавления образца. Тест COBAS Am-plicor HBV Monitor (Roche Molecular Systems, Pleasanton, CA, USA) использовался для измерения концентрации ДНК HBV в сыворотке крови в течение периода исследования, который имеет более низкий предел обнаружения 20 МЕ / мл.

Статистический анализ проводился с использованием SPSS версии 17.0 (SPSS Inc., Чикаго, Иллинойс, США). Непрерывные переменные были выражены как среднее ± стандартное отклонение. Корреляции между титрами HB-sAg и концентрациями ДНК HBV анализировали с использованием Rho-метода Спирмена. Средние значения сравнивали с использованием теста Крускала-Уоллиса, а пост-hoc-анализ проводили с использованием теста Манна-Уитни U. Тенденции распределения титров HBsAg среди разных возрастных групп были проанализированы с использованием теста Jonckheere-Terpstra. Значение p менее 0,05 считалось статистически значимым.

В целом, данные из 627 образцов соответствовали критериям включения. Базовые характеристики всех подходящих пациентов, относящихся к различным стадиям CHB и различным группам результатов лечения, представлены в таблице 1. Все пациенты имели азиатскую этническую принадлежность, а большая доля (64,3%) от общего числа пациентов составляла мужчина. Из 627 образцов из парных образцов у пациентов, получавших лечение интерфероном (n = 34), у пациентов с вирусологическим прорывом во время лечения NUC (n = 4) или у тех, кто прекратил лечение NUC (n = 55), были исключены из классификации в различные фазы CHB. Таким образом, 534 парных образца были разделены на восемь различных групп. Среди 267 образцов, полученных от пациентов, не получавших лечение, 36 были в ИТ-фазе; 48, в ИК; 116, в LR; и 67, в ENH. Оставшиеся 267 образцов, полученных от пациентов, получавших NUC, были классифицированы следующим образом: 46 были в группе E + VR; 81, в E + pVR; 69, в E-VR +; и 71, в E-pVR.

Средние титры HBsAg значительно отличались среди восьми подгрупп, а значения титра на фазу для пациентов, не получавших лечение, составляли в среднем 71 686,7 МЕ / мл в ИТ, 36,995,5 МЕ / мл в ИК, 7 317,0 МЕ / мл в LR и 7 805,4 МЕ / мл в ENH (фиг.1А). Средний титр HBsAg был значительно выше в ИТ, чем в ИК (p = 0,043), но разница в средних титрах HBsAg между LR и ENH не была статистически значимой (p = 0,121). Средний титр HBsAg на фазу для пациентов, получавших NUC, составлял 8 273,5 МЕ / мл в E + VR, 13 368,8 МЕ / мл в E + pVR, 3,751,6 МЕ / мл в E-VR и 5 172,2 МЕ / мл в E-pVR ( Фиг.1В). Средний титр HBsAg был значительно выше в E + pVR, чем в E + VR (p = 0,027), а также был значительно выше в E-pVR, чем в E-VR (p = 0,009). Средний титр HBsAg был значительно выше в ИТ плюс IR, чем в LR плюс ENH (p

Корреляции между титрами HBsAg и концентрациями ДНК HBV показаны на рисунке 2. Небольшая корреляция наблюдалась в ИТ-и ИК-фазах (r = 0,804, p

Средний титр сыворотки HBsAg, как правило, был значительно выше в младших возрастных группах, чем в старших возрастных группах. Средние титры HBsAg в сыворотке, как правило, постепенно уменьшались по мере увеличения уровня 10-летнего возраста (p для тренда

Это исследование предназначалось для оценки различий титров HBsAg в сыворотке на разных фазах CHB и выявления корреляций между титрами HBsAg и концентрациями ДНК HBV с использованием IRMA. Все изучаемые предметы были корейскими и азиатскими этническими группами, которые преимущественно укрывали генотип C HBV.23,24. В предыдущих исследованиях были продемонстрированы корреляции между титрами HBsAg и концентрациями ДНК HBV с использованием CMIA, 12,13,15-18 и IRMA показала эффективность аналогично CMIA в отношении количественной оценки HBsAg.19 Насколько нам известно, это первый, кто проанализирует корреляции между титрами HBsAg и концентрациями ДНК HBV на разных фазах CHB с использованием IRMA.

Как в ИТ, так и в ИК-фазах наблюдалась умеренная корреляция между титрами HBsAg и концентрациями ДНК HBV; однако он не был воспроизведен ни в фазах LR, ни в ENH, ни в группе, обработанной NUC. Наши результаты были аналогичны результатам предыдущих исследований; умеренная корреляция была показана между титрами HBsAg и концентрациями ДНК HBV у пациентов с HBeAg-положительным. Однако это было не так для пациентов с отрицательным HBeAg.16,18

Сыворотка HBsAg существует как зрелые вирионы, так и более мелкие неинфекционные субвирусные частицы.25,26 В ИТ-фазе HBV может наиболее свободно и активно реплицироваться и распространяться, не вызывая неизбежных иммунных реакций.27 В этой фазе большинство сывороточных HBsAg-частиц могут быть компоненты полных вирионов, что объясняет положительную корреляцию между концентрациями ДНК HBV и титрами HBsAg в ИТ-фазе.28,29

В ИК-фазе обе ДНК HBV в сыворотке как часть вириона и внутрипеченочной cccDNA одновременно поражаются иммунными ответами.30,31 Следовательно, производство сывороточного HBsAg, ДНК HBV и внутрипеченочной cccDNA может одновременно снижаться и положительная корреляция между концентрациями ДНК HBV и титрами HBsAg сохраняется во время иммунной опосредованной травмы. В настоящем исследовании средний титр HBsAg был ниже в ИК-фазе, чем в ИТ-фазе, что может быть связано с иммунным зазором.

В фазе LR иммунологический контроль инфицирования HBV начинается с ингибирования репликации вируса и снижения концентрации ДНК HBV в сыворотке.31-33. Спонтанные иммунные реакции также индуцируют снижение вирионов и их частиц HB-sAg.16,34,35 Однако, иммунная реакция недостаточно устойчива для очистки инфицированных гепатоцитов cccDNA и уменьшения продуцирования субвирусных частиц. Это может объяснить расхождение между концентрациями ДНК HBV в сыворотке и титрами HBsAg во время фазы LR.

В фазе ENH реактивация репликации HBV приводит к увеличению производства вирионов; иммунная активация также одновременно опосредует ингибирование репликации вируса.36,37 Следовательно, сбор вириона может в некоторой степени иметь место в фазе ENH, хотя и не так сильно, как в ИК-фазе. Кроме того, огромное количество HBsAg сыворотки, обнаруженное в фазе ENH, может быть компонентом субвирусных частиц, но не полным вирионов. Эта гипотеза подтверждается предыдущим исследованием, которое показало плохую корреляцию между титрами HBsAg и концентрацией cccDNA у пациентов с HBeAg-отрицательным результатом18.

Предыдущие исследования показали, что HBeAg-положительные пациенты имеют более высокие титры HBsAg, чем HBeAg-отрицательные пациенты, что соответствует нашим результатам.15-18 Спонтанная сероконверсия HB-sAg в течение длительного периода наблюдения не является чем-то необычным, и скорость сероконверсии увеличивается с увеличением продолжительности наблюдения.34,38,39 Это может объяснить наши результаты, в которых титры HBsAg имели тенденцию к уменьшению с возрастом. Можно предположить, что при длительной продолжительности заболевания инфицированные гепатоциты постепенно удаляются иммунной системой. Средний титр HBsAg был значительно ниже у пациентов с циррозом и HCC, чем у пациентов без цирроза и HCC. Хорошо известно, что более высокие титры HBsAg на исходном уровне связаны с более высокой частотой цирроза печени или HCC в течение периода наблюдения.40,41 Однако мы не получали титры HBsAg в начале исследования, но сравнили титры HBsAg пациентов, у которых уже был цирроз печени или HCC с титрами HBsAg у тех, у кого не было цирроза печени или HCC. Мы предполагали, что более длительная продолжительность заболевания или хроническое гепатоцеллюлярное повреждение могут привести к уменьшению абсолютной cccDNA, внутрипеченочной нагрузки HBV; однако это остается недоказанным. Тенденция к снижению титров HBsAg у пациентов с преклонным возрастом, циррозом и HCC может дать некоторые рекомендации для прогнозирования клинических исходов. Тем не менее, неясно, может ли дискриминация, основанная на оптимальных значениях отсечки титров HBsAg, была бы полезна для прогнозирования спонтанной сероконверсии и прогрессирования цирроза и ГЦК.

В настоящем исследовании мы сравнивали титры HBsAg между пациентами, не получающими лечение, и теми, кто получал устные NUC. Недавние данные указывают на потенциальную роль количественной оценки HBsAg при мониторинге лечения при пэгилированной терапии интерфероном. 42-44 Однако было мало данных о клинической полезности количественной оценки HBsAg для прогнозирования вирусологических ответов во время пероральных методов NUC. Недавнее ретроспективное исследование показало, что исходный титр HBsAg 0,666 log IU / mL / yr были хорошими предикторами серологического анализа HBsAg во время лечения NUC.45 Однако дальнейшие исследования с участием продольного анализа титров HBsAg наряду с длительной обработкой NUC необходимы для определения оптимальных значений отсечки, связанных с вирусным разминированием.

Наше исследование имеет несколько ограничений из-за его ретроспективного характера и конструкции поперечного сечения. Определение различных фаз CHB основывалось главным образом на лабораторных данных. Следовательно, это могло бы неизбежно привести к смещению ошибочной классификации. Однако в настоящем исследовании дифференциальный анализ проводился с использованием IRMA для количественной оценки HBsAg у пациентов, которые были либо наименее лечились, либо лечились NUC. В частности, для наихудших по отношению к терапии, корреляционный анализ между результатами ДНК HBsAg и HBV проводился на разных этапах CHB.

Хотя прямое сравнение между CMIA и IRMA было нецелесообразным в нашем исследовании, степень корреляции между титрами HBsAg и концентрациями ДНК HBV в нашем исследовании была сильнее, чем в предыдущих исследованиях или, по крайней мере, была аналогична результатам на разных этапах CHB .15,17 В нашем исследовании коэффициент корреляции в IT-фазе составлял 0,804, что было намного выше результатов предыдущих исследований (0,300 и 0,340). В IC-фазе коэффициент корреляции составлял 0,773 в нашем исследовании; однако предыдущие исследования показали соответственно 0,770 и 0,110 коэффициента корреляции. С другой стороны, было проведено только одно исследование, которое исследовало корреляцию между титрами HBsAg и концентрациями ДНК HBV у пациентов с циррозом печени или HCC.13 Среди пациентов с циррозом печени коэффициент корреляции составлял 0,383 (p

В заключение, титры HBsAg варьировали в разных фазах CHB у пациентов, не получавших лечение. Кроме того, титры HBsAg были значительно ниже у пациентов, достигших возраста, получавших NUC, или имели цирроз или HCC. Количественные титры HBsAg, измеренные с использованием IRMA, показали положительную корреляцию с вирусной нагрузкой у HBeAg-положительных пациентов. Эти результаты предполагают некоторые потенциальные роли для количественной оценки HBsAg в мониторинге естественного курса и клинических исходов у пациентов с ХГБ. Дальнейшие исследования необходимы для выяснения потенциальной роли количественного определения HBsAg в качестве суррогатного маркера при оценке активности болезни и контрольных ответов на лечение.

КОНФЛИКТ ИНТЕРЕСОВ

Не сообщалось о потенциальном конфликте интересов, относящемся к этой статье.

Эта статья была представлена ​​в виде плаката на ежегодном собрании Американской ассоциации по изучению заболеваний печени (AASLD) в Бостоне, 9-13 ноября 2012 года.

Сравнение титра среднего поверхностного антигена гепатита B (HBsAg) среди различных фаз хронического гепатита B (CHB) и различных групп результатов лечения. (A) Лечение — наивные пациенты; (B) пациентов с нуклеотидами (t).

IT, иммунотолерантная фаза; IR, иммунореактивный гепатит B e антиген (HBeAg) -положительная фаза; LR, низкорепликативная фаза; ENH, HBeAg-отрицательный CHB; E + VR, HBeAg-положительный CHB с вирусологическим ответом; E + pVR, HBeAg-положительный CHB с частичным вирусологическим ответом; E-VR, HBeAg-отрицательный CHB с вирусологическим ответом; E-pVR, HBeAg-отрицательный CHB с частичным вирусологическим ответом.

Корреляции между титрами поверхностного антигена сывороточного гепатита B (HBsAg) и концентрацией ДНК вируса гепатита B (HBV) в разных фазах хронического гепатита B (CHB). (A) Общая численность населения; (B) иммунотолерантная фаза (IT); (C) иммунореактивный гепатит B e антиген (HBeAg) -положительная фаза (IR); (D) низкорепликативная фаза (LR); (E) HBeAg-отрицательный CHB (ENH); (F) HBeAg-положительный CHB с вирусологическим ответом (E + VR); (G) HBeAg-положительный CHB с частичным вирусологическим ответом (E + pVR); (H) HBeAg-отрицательный CHB с вирусологическим ответом (E-VR); (I) HBeAg-отрицательный CHB с частичным вирусологическим ответом (E-pVR).

Распределение титров поверхностного антигена гепатита В (HBsAg) в 10-летних слоях.

Сравнение средних титров поверхностного антигена гепатита В (HBsAg) между пациентами с циррозом печени и без него.

Сравнение средних титров поверхностного антигена гепатита В (HBsAg) между пациентами с и без гепатоцеллюлярной карциномы.

Базовые характеристики включенных пациентов

Данные представлены как среднее ± SD или число (%).

IT, иммунотолерантный; ИК, иммунореактивный; LR, с низкой репликативностью; ENH, HBeAg-отрицательный CHB; E + VR, HBeAg-положительный CHB с вирусологическим ответом; E + pVR, HBeAg-положительный CHB с частичным вирусологическим ответом; E-VR, HBeAg-отрицательный CHB с вирусологическим ответом; E-pVR, HBeAg-отрицательный CHB с частичным вирусологическим ответом; ALP, щелочная фосфатаза; ALT, аланинаминотрансфераза; АСТ, аспартатаминотрансфераза; LC, цирроз печени; HCC, гепатоцеллюлярная карцинома.



Источник: rupubmed.com


Добавить комментарий